特别提示：本文为“中国睡眠研究会第十一届全国学术年会”壁报交流论文。
摘 要
目的：观察蜂眠宁胶囊对失眠大鼠神经递质的影响，探讨其治疗失眠的药理机制。方法：将SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(艾司唑伦片2mg.kg-1.d-1)和低、中、高剂量蜂眠宁胶囊组(0.3g、0.6、0.9g.kg-1.d-1)，每组10只。除正常组外，其余各组大鼠采用腹腔注射对氯苯丙氨酸（PCPA）建立大鼠失眠模型，造模后各给药组大鼠连续灌胃给相应药物1周，正常组和模型组大鼠灌胃生理盐水。测定大鼠脑组织中谷氨酸( Glu)、γ-氨基丁酸( GABA) 和下丘脑中白细胞介素1β(IL- 1β)、5-羟色胺( 5-HT) 含量。
结果：与正常组比较，各组脑组织中Glu、GABA含量增加，下丘脑中IL- 1β、5-HT含量减少( P< O.05)；与模型组比较，各给药组大鼠上述指标均得到明显改善( P<0.05，P<0.01)；与阳性组比较， 蜂眠宁胶囊中、高剂量组大鼠上述指标变化更为明显( P<O.05)。
结论：蜂眠宁胶囊可降低脑内神经递质含量、减轻Glu、GABA参与的迟发性神经元损害，其高剂量优于阳性对照药艾司唑伦片。蜂眠宁胶囊可明显改善失眠的机制可能与其降低脑内Glu、 GABA含量，减轻Glu、GABA参与的迟发性神经元损伤，增加下丘脑IL-1β、5-HT含量有关。
关键词： 蜂眠宁胶囊；失眠；缬草；神经递质
蜂眠宁胶囊是由缬草、蜂胎冻干粉、黄芪、酸枣仁制备而成，具有明显的改善睡眠、延缓衰老、预防老年痴呆的作用[1]。为进一步研究其作用机理，为临床应用提供理论依据，本研究中拟考察蜂眠宁胶囊对失眠模型大鼠脑组织中谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、5-羟色胺（5-HT）以及下丘脑中白细胞介素1β（IL-1β）含量的影响。
1 材料
1.1 仪器
ALCYON300全自动生化分析仪，美国雅培；BS110S型sartorius电子天平，北京赛多利斯天平有限公司；高速离心机(上海医用分析仪器厂)；Waterse2695高效液相色谱仪（美国Waters公司）。
1.2 药材、药品与试剂
蜂眠宁胶囊（武汉惠尔生物科技有限公司，批号：20170301）；艾司唑仑片(焦作市博爱药业有限公司，批号：20161203)；IL-1β酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒（南京建成生物工程研究所）；5-HT ELISA试剂盒（南京建成生物工程研究所）；醋酸钠缓冲液、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
1.3 动物
SPF级SD大鼠60只，体量(200±20)g，雌雄各半，购于湖北省实验动物中心（合格证号SCXK(鄂)2012-0007）。室温为23～2 5℃，相对湿度为40％～70％，空气新鲜，通风良好，大鼠雌雄分笼，固体饲料喂养，自由饮水，正式开始实验前适应性饲养7天左右。
2 方法
2.1 实验分组、 造模与给药［2］
将6O只健康 SD大鼠随机分为6组，即正常组、模型组、阳性组（艾司唑伦片2mg.kg-1.d-1 ）和蜂眠宁胶囊组低、中、高剂量组（0.3g、0.6、0.9g.kg-1.d-1），每组10只。除正常组外，其他各组均采用腹腔注射PCPA混悬液（350mg2mg.kg-1.d-1）建立大鼠失眠模型，每天 1 次，连续2天。从造模第3天开始，阳性对照组灌胃艾司唑伦片，蜂眠宁胶囊各给药组分别灌胃不同浓度的蜂眠宁胶囊低、中、高剂量，正常对照组和模型组灌胃给于相同体积的生理盐水，每天灌胃给药 1 次，持续7天。
2.2 各组大鼠脑组织中Glu、 GABA含量的测定
各组大鼠禁食24h后，采用断头法处死。取大鼠左侧脑组织，离心 1 5min, 离心速度为 3000 r／min，重复操作2次，收集上清液。采用高效液相色谱法检测脑组织中Glu、GABA含量[2]。
2.3各组大鼠下丘脑中IL-1β、5-HT含量的测定
取上述处死的大鼠，迅速剪断延髓，将脑组织快速去除,分离出下丘脑，洗净血液，于-8 0℃条件下保存。采用ELISA 法测定下丘脑IL-1β、5-HT含量，具体操作按照相应试剂盒说明书进行。
2.4 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行分析。计量资料以±SD表示，组间比较采用单因素方差分析；计数资料采用检验。P< 0.05表示差异有统计学意义。
3 结果
3.1 各组大鼠脑组织中Glu、GABA含量测定结果
与正常组比较，模型组大鼠脑组织中Glu、GABA含量增加（P<O.01）；说明造模成功。与模型组比较,各给药组大鼠脑组织中Glu、GABA含量减少（P<O.05、P<O.01）；与阳性组比较，蜂眠宁胶囊高剂量组大鼠脑组织中Glu、GABA含量减少，效果优于艾司唑仑片( P<O.05)。
各组大鼠脑组织中Glu、 GABA含量测定结果见表1。
表1 各组大鼠脑组织中Glu、 GABA含量测定结果(±SD，n=10)
组别 剂量 Glu（g/L） GABA（g/L）
正常组 0.31±0.07 0.25±0.06
模型组 0.62±0.05●● 0.45±0.08●●
阳性组 2mg.kg-1.d-1 0.49±0.09** 0.36±0.06*
蜂眠宁低剂量组 0.9g.kg-1.d-1 0.52±0.09 0.40±0.08
蜂眠宁中剂量组 0.9g.kg-1.d-1 0.43±0.07** 0.33±0.07**
蜂眠宁高剂量组 0.9g.kg-1.d-1 0.36±0.06**# 0.27±0.05**#
与正常组比较：●●P<O.01；与模型组比较：*P<0.05、**P<0.01；与阳性比较：#P <0.05。
3.2 各组大鼠下丘脑中IL-1β、5-HT含量测定结果
与正常组比较，模型组大鼠下丘脑中IL-1β、5-HT含量减少( P<0.01)；与模型组比较，各给药组大鼠下丘脑IL-1β、5-HT含量增加，差异具有显著性 （P<0.05、P<0.01）；与阳性组比较，蜂眠宁胶囊中、高剂量组大鼠下丘脑中IL-1β、5-HT含量增加（P< 0.05、P<0.01）。各组大鼠下丘脑中IL-1β、5-HT含量测定结果见表2。
表2 各组大鼠下丘脑中IL-1β、5-HT含量测定结果(±SD，n=10)
组别 剂量 IL-1β（pg/ml） 5-HT（ng/g）
正常组 181.37±15.32 319.14±19.47
模型组 106.55±13.01●● 223.93±15.47●●
阳性组 2mg.kg-1.d-1 145.26±16.21** 260.16±17.11**
蜂眠宁低剂量组 0.9g.kg-1.d-1 122.71±16.13 240.36±18.25
蜂眠宁中剂量组 0.9g.kg-1.d-1 157.19±17.26**# 279.28±15.55**#
蜂眠宁高剂量组 0.9g.kg-1.d-1 170.08±15.34**## 298.12±17.43**##
与正常组比较：●●P<O.05；与模型组比较：*P<0.05、**P<0.01；与阳性比较；#P<0.05、##P<0.01。
4 讨论
神经递质是机体信息传递的物质基础，同时还参与机体很多生理、病理过程，具有调节睡眠的作用。机体中枢神经兴奋和抑制功能失调与失眠有密切关系，其中Glu和GABA是哺乳动物中枢神经系统的重要神经递质[3]。Glu作为兴奋性氨基酸，能够引起觉醒增多、总睡眠时间与慢波睡眠减少[4]。GABA是一种抑制性神经递质，广泛分布于外周神经系统和中枢神经系统，对哺乳动物中枢神经系统具有普遍的抑制作用[4]。本研究结果显示，与模型组比较，蜂眠宁胶囊各剂量组大鼠脑内Glu、GABA含量均显著减少，且随着给药剂量的增加脑内Glu、GABA含量减少越明显。近年研究发现，细胞因子可作用于中枢神经系统参与睡眠的调节。大鼠下丘脑中的IL-1β表达存在昼夜规律，表达高峰相与睡眠高反抑制，通过外源性补充IL-1β后能够延长大鼠的快速动眼睡眠时间。5-HT经元胞体主要集中于中缝核群,中缝核头部的5-HT神经元能够参与维持和产生非快速动眼睡眠，并且5-HT神经元在觉醒时兴奋性最高，兴奋5-HT神经元能够使觉醒时间延长。本研究结果显示，与模型组比较，蜂眠宁胶囊各剂量组大鼠脑内IL-1β、5-HT含量均显著增加 。
综上所述，蜂眠宁胶囊可明显改善失眠的机制可能与其降低脑内Glu、 GABA含量，减轻Glu、GABA参与的迟发性神经元损伤，增加下丘脑IL-1β、5-HT含量有关。
参 考 文 献
1熊义涛，敖明章，但汉雄，等.蜂眠宁胶囊对肾虚型老年痴呆大鼠的改善作用[J].湖北中医药大学学报，2018，20（3）：10-13.
2肖成荣，马增春，李海静，等.PCPA失眠大鼠模型的制备及其机制[J].毒理学杂志,2007,21(4):326.
3蒋洁，赵百孝，哈略，等．不同波形电针对PCPA致失眠大鼠下丘脑5-HT和Glu、 GABA含量的影响[J]．上海针灸杂志，2015，12(7)：678.
4游秋云，王平，吴丽丽，等．舒郁安神方对老年肝郁失眠证候模型大鼠学习记忆及脑组织谷氨酸、γ-氨基丁酸含量的影响[J]．中国老年学杂志，2011， 31( 6)：1006．
5王冰梅,于江波，王永彬，等．安神补脑软胶囊对老年失眠模型大鼠下丘脑5-羟色胺la、 5-羟色胺 2 a、γ-氨基丁酸表达量的影响[J]．中国老年学杂志， 2015，35(17):4784．
